实验方案库
实操篇1|慢病毒包装:从质粒到病毒颗粒
本文是林剑锋老师专门为老司机的各位同学撰写的《慢病毒完全指南》中的实操篇第一部分,介绍了如何构建三质粒系统包装、获取慢病毒,以及相关常见问题解析。
技巧篇|慢病毒实验高手才知道的N个细节
本文是林剑锋老师专门为老司机的各位同学撰写的《慢病毒完全指南》中的技巧篇,介绍了慢病毒设计包装制备全流程中的16点技巧。
实操篇2|慢病毒感染:精准递送的策略与艺术
本文是林剑锋老师专门为老司机的各位同学撰写的《慢病毒完全指南》中的实操篇第二部分,介绍了慢病毒感染与递送这一部分。
应用篇|慢病毒在科研中的六大用武之地
本文是林剑锋老师专门为老司机的各位同学撰写的《慢病毒完全指南》中的应用篇。介绍的是慢病毒在生命科学中的6个主要应用方向。
入门篇|慢病毒:实验室里的基因“特快专递”
本文是林剑锋老师专门为老司机的各位同学撰写的《慢病毒完全指南》中的入门篇。介绍的是慢病毒的基本概念与慢病毒在实验中的特性与应用。
单细胞ATAC分析基本内容简述
本文档概述了单细胞ATAC-seq分析的基本流程,包括从原始测序数据到最终细胞聚类与注释的关键步骤。内容涵盖数据质控、比对、peak calling、细胞过滤、降维聚类以及基因活性分析等核心环节,为理解单细胞染色质可及性分析提供了框架性指导。
单细胞ATAC分析流程
本方案详细描述了从单细胞ATAC-seq原始测序数据(fastq文件)开始,到获得可解释的染色质可及性分析结果(如细胞聚类、差异可及性区域鉴定)的完整生物信息学分析流程。涵盖了数据质控、序列比对、peak calling、细胞过滤、降维聚类和注释等关键步骤。
单细胞ATAC下游分析2:ArchR分析-降维、去批
本方案详细介绍了使用ArchR软件包对单细胞ATAC-seq数据进行下游分析的流程,核心步骤包括降维(使用LSI和UMAP)以及批次效应校正(Harmony整合)。旨在从高维稀疏的染色质开放性数据中提取生物学信号,并整合多个样本以进行后续分析。
单细胞ATAC下游分析1:使用ArchR构建ArchRProject及数据质控
本实验方案详细介绍了如何使用ArchR软件包对单细胞ATAC-seq数据进行下游分析的第一步:构建ArchRProject对象并进行初步数据质控。内容包括数据导入、元数据添加、质控指标计算(如TSS富集分数、核小体信号、双峰比例等)以及基于质控结果过滤细胞。
单细胞ATAC上游分析实战
本实验方案详细介绍了单细胞ATAC-seq数据的上游分析流程,包括从原始测序数据(fastq文件)开始,进行质量控制、比对、峰检测、细胞核识别到最终生成细胞-峰矩阵的完整步骤。方案基于snakemake流程构建,适用于在服务器或高性能计算集群上处理10x Genomics平台产生的单细胞ATAC-seq数据。
BMDC细胞制备、培养的具体步骤和注意事项
BMDC细胞即骨髓来源的树突状细胞(Bone Marrow-Derived Dendritic Cells),是机体免疫系统中重要的抗原呈递细胞,能够摄取、加工和呈递抗原给T细胞,启动适应性免疫应答。通过研究BMDC细胞与T细胞的相互作用,以及在不同免疫刺激下BMDC细胞的激活、成熟过程,可以深入了解免疫系统识别和应对病原体的分子机制和细胞信号通路。本文介绍的是其制备和培养的具体步骤及注意事项。
HSF细胞的复苏、传代和冻存操作步骤
HSF细胞(Human Skin Fibroblasts)指人皮肤成纤维细胞,是来源于人体皮肤组织的成纤维细胞,主要从人体皮肤(如真皮层)分离获得。HSF细胞属于间充质来源的贴壁生长细胞,形态呈梭形或多角形,具有典型的成纤维细胞形态特征。 提前将培养基放进37°C水浴锅中,准备好15mL离心管、巴氏吸管。 取出细胞冻存管,迅速放进37°C水浴锅中,晃动冻存管,使之快速融化复温。 将化冻的细胞(1mL)加到含9mL预热完全培养基的15mL离心管中,轻轻吹吸混匀后200×g离心5分钟。弃上清。 加入2mL完全培养基重悬细胞后,转移至含有3mL完全培养基的T25细胞培养瓶中,置于37°C,5% CO2二氧化碳培养箱中培养。
BMDC细胞的制备与培养
本方案详细描述了从小鼠骨髓中分离、诱导和培养树突状细胞(BMDC)的具体操作流程,包括骨髓单核细胞的获取、GM-CSF诱导分化、细胞换液与扩增、以及收获前的表型鉴定准备。方案涵盖了关键的材料准备、无菌操作要点和细胞状态评估标准。
苏木精-伊红染色法(HE染色)
苏木精-伊红染色法(HE染色)是组织学中最常用的染色方法,用于显示细胞核和细胞质的基本形态结构。苏木精将细胞核染成蓝紫色,伊红将细胞质和细胞外基质染成粉红色,便于在光学显微镜下观察组织结构和病理变化。
异丙醇沉淀法提取植物miRNA
本实验方案详细描述了使用异丙醇沉淀法从植物组织中提取miRNA的完整流程。包括组织研磨、均质化、离心分离、异丙醇沉淀、洗涤纯化以及RNA的定量与定性分析等关键步骤,适用于植物样本中微小RNA的分离与制备。
血浆外泌体的分离和RNA提取
本方案详细介绍了从血浆样本中分离外泌体,并进一步从分离得到的外泌体中提取总RNA的实验流程。该流程是进行外泌体相关分子生物学研究(如miRNA测序、表达分析)的关键前期步骤。
类囊体提取方案
本方案描述了从植物幼苗样本中提取类囊体的标准流程。通过使用冰冷的分离缓冲液、快速均质化、过滤和梯度离心,旨在获得尽可能纯净的类囊体,用于后续如磷酸化蛋白等研究。整个过程需在低温、避光条件下进行,并使用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的缓冲液以保持蛋白完整性。
跨膜蛋白样本制备前处理注意事项
本方案概述了针对跨膜蛋白进行样本制备(如前处理)时的关键注意事项与操作要点。跨膜蛋白疏水性强、结构复杂,易聚集或失活,方案旨在通过优化裂解、增溶、稳定化等步骤,为后续的Western Blot、质谱分析等下游应用获取高质量蛋白样本。
从不同类型样本中分离膜蛋白的方法
本方案详细介绍了从细胞、组织等不同类型生物样本中分离和富集膜蛋白的实验流程。通过匀浆、差速离心、密度梯度离心等关键步骤,旨在获得高纯度、高完整性的膜蛋白,为后续的蛋白质组学、功能与相互作用研究提供高质量的样品基础。
超微量分光光度计测定核酸浓度和纯度的数据分析经验
本文基于NEB技术文献,系统分析了使用超微量分光光度计测量核酸浓度和纯度时的影响因素与数据解读要点。重点探讨了低浓度样品的测量波动性、A260/A280与A260/A230在蛋白污染检测中的差异、RNA污染的检测灵敏度以及不同盐类污染物对读数的影响,旨在帮助实验者正确评估核酸样品质量。