实验方案库
大鼠急性/慢性肩袖损病模型
本protocol介绍了通过手术方法建立大鼠肩袖急性撕裂与慢性退变性损伤模型的详细步骤,用于模拟人类肩袖疾病的病理过程,可以作为研究肩袖损伤修复机制与治疗策略的关键临床前实验模型。
裂殖壶藻藻油DHA对高脂饮食C57BL/6小鼠脂质代谢的 影响以及灌胃基本操作心得
本实验研究二十二碳六烯酸(DHA)对高脂饮食诱导的肥胖小鼠模型的代谢干预效果。通过给小鼠喂食高脂饲料建立模型,并补充DHA,随后检测其体重、血糖、血脂及相关组织病理学变化,以评估DHA对代谢素乱的改善作用。
Pull down 实验
本protocol描述了一种主流蛋白质相互作用的研究方法。将目的蛋白结合特定标签如GST或His等,与感兴趣的蛋白相互作用形成复合物,最后通过亲和层析等方法从细胞裂解液中捕获并验证与其相互作用的靶蛋白的实验流程。这是一种体外验证或发现蛋白质间直接相互作用的重要技术。
细胞热位移实验方案
本protocol描述了细胞热位移实验(Cellular Thermal Shift Assay, CETSA)的流程,通过蛋白质对热稳定性的不同相应,可在细胞裂解物或完整细胞中分析目标蛋白的完整性与溶解性,从而间接评估小分子化合物与靶蛋白的结合情况。
镍柱纯化标签蛋白
本protocol描述了一种镍柱纯化方法,也就是亲和层析(IMAC)。该方法利用组氨酸标签与镍离子的特异性结合,通过改变洗脱条件(咪唑浓度)将带有组氨酸标签(His-tag)的重组蛋白从杂蛋白中分离出来,是重组蛋白纯化的常用技术。
磷酸化蛋白的Western Blot经验总结
本文总结了使用Western Blot技术检测和分析磷酸化蛋白表达水平的实验经验,介绍了诸多难点要点,如如何有效保持蛋白质磷酸化状态、优化实验条件以及提高检测特异性。
考马斯亮蓝染色
本protocol介绍的是使用考马斯亮蓝染色法对蛋白质进行定性和半定量分析的方法。考马斯亮蓝染料与蛋白质的碱性氨基酸结合产生蓝色复合物,对凝胶或膜上的蛋白质条带进行染色,可以检测蛋白质表达水平、纯化效果或电泳分离结果。
蛋白电泳实验方法:SDS-PAGE和PAGE
本文介绍了SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)和PAGE(非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)两种电泳技术,二者的关键差别在于SDS-PAGE中加入了使蛋白质变性的SDS。SDS-PAGE仅根据分子量大小分离蛋白质,而PAGE则是在非变性条件下根据蛋白质的电荷、大小和形状等进行分离。
Bradford法测定蛋白质含量
本protocol描述了使用Bradford法测定溶液中蛋白质含量的标准流程。该方法的原理是考马斯亮蓝G-250染料与蛋白质结合后产生蓝色复合物引起吸光度变化,通过在595nm波长下进行比色分析来测定未知样品的蛋白质浓度。该法快速、灵敏且操作简便,适用于多种生物样品的蛋白质定量分析。
Dot blot
本protocol描述的是Dot Blot技术,此法用于快速、半定量检测蛋白质与核酸水平。该技术将蛋白质样品直接点样于固相载体上,通过特异性抗体或探针与待测物进行杂交显色,得知目标分子是否存在
U87MG肿瘤细胞培养的实验步骤和注意事项
本方案详细介绍了人胶质母细胞瘤细胞系U87MG的常规培养流程,包括细胞复苏、传代、冻存及培养过程中的关键注意事项,旨在维持细胞良好的生长状态并提供合格的实验材料。
紫外线对培养基和血清的影响分析
本文探讨了在细胞培养前,将培养基、血清等试剂放入生物安全柜内进行紫外线照射是否会影响其生物活性。通过分析紫外线的灭菌原理(特别是UVC波段)及其穿透能力,指出在【瓶盖紧闭】的情况下,紫外线无法穿透塑料或玻璃瓶壁,因此不会破坏试剂内的有效成分。同时,文章也提醒了紫外线照射可能产生低浓度臭氧及其安全注意事项。
细胞原代分离和培养
本方案详细介绍了从动物或临床组织样本中进行原代细胞分离和培养的完整流程。内容包括组织获取、分离、解离(机械法与酶消化法)以及接种培养的关键步骤与注意事项,旨在获得高存活率的原代细胞用于后续研究。
细胞系的消化和传代
本方案详细描述了贴壁细胞和悬浮细胞传代的标准操作流程,重点介绍了使用胰酶消化贴壁细胞的关键步骤、技巧及注意事项,包括消化时间的控制、消化终止、细胞重悬、计数和分瓶培养等。
细胞计数和铺板
本实验方案详细介绍了细胞培养中细胞计数和铺板的标准操作流程。内容包括使用血球计数板进行细胞计数的具体步骤、细胞浓度的计算方法,以及两种不同的细胞铺板方法及其注意事项,旨在确保细胞实验的准确性和可重复性。
细胞冻存和复苏
本方案详细介绍了细胞培养中至关重要的细胞冻存与复苏操作。冻存旨在长期保存细胞株,防止其因传代次数增加而变异或老化,并规避实验风险。复苏则是将冻存细胞快速解冻并恢复生长的过程,其核心原理是“慢冻快融",以避免冰晶对细胞造成损伤。方案涵盖了从冻存液配制、细胞收集、分装标记、逐步降温,到复苏前准备、快速化冻、细胞转移、离心培养及后续观察的完整流程与关键注意事项。
使用Hoechst33258检测支原体污染
本实验方案利用Hoechst 33258荧光染料对细胞培养物进行染色,这通过荧光显微镜观察细胞核外的荧光信号,从而检测细胞培养中是否存在难以察觉的支原体污染。该方法基于支原体DNA与染料结合后产生特异性荧光的原理,是一种常用的细胞质量监控手段。
人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养方法
本方案详细介绍了人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的体外培养、传代、冻存与复苏的标准操作流程,旨在为血管生物学研究提供稳定、健康的细胞来源。
VSMC 血管平滑肌细胞培养方法
本方案描述了血管平滑肌细胞(VSMC)的体外培养流程,包括细胞复苏、传代、冻存及常规维持等关键操作,旨在为心血管疾病研究提供稳定可靠的细胞模型。
THP-1 细胞培养方案
本方案详细介绍了人急性单核细胞白血病细胞系THP-1的培养、复苏、传代、冻存标准操作流程及注意事项。THP-1细胞是研究单核/巨噬细胞相关机制的重要体外模型,方案涵盖了从培养基配制到细胞状态维护的全过程。