分子生物学
Western Blot (WB) 与实时定量PCR (qPCR) 实验重复的区别
本文旨在阐明Western Blot和qPCR两种常用分子生物学技术在实验重复设计上的核心区别,包括技术原理、重复类型(技术重复与生物学重复)的定义、应用场景以及数据分析层面的考量,为实验设计提供指导。
如何合理设计siRNA的作用时间和浓度
本protocol介绍了如何设计实验确定siRNA的作用浓度和作用时间,以优化基因敲低效率并减少脱靶效应。
异丙醇沉淀法提取植物miRNA
本实验方案详细描述了使用异丙醇沉淀法从植物组织中提取miRNA的完整流程。包括组织研磨、均质化、离心分离、异丙醇沉淀、洗涤纯化以及RNA的定量与定性分析等关键步骤,适用于植物样本中微小RNA的分离与制备。
慢病毒感染实验
本protocol描述了使用慢病毒作为载体系统感染靶细胞,以研究特定基因的转录调控机制的方法。通过构建携带报告基因或目的基因的慢病毒,感染细胞后分析基因表达变化。
双荧光素酶报告基因系统
本protocol描述了利用双荧光素酶报告基因系统研究基因转录调控的实验方法。通过共转染萤火虫荧光素酶报告基因质粒和海肾荧光素酶内参质粒到细胞中,并检测两种酶的活性,可以定量分析特定顺式作用元件或转录因子对目标基因启动子活性的影响。该系统通过内参校正,有效减少了实验误差。
琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳是一种用于分离、鉴定和纯化DNA片段的常用分子生物学技术。其原理是利用DNA分子在琼脂糖凝胶基质中,在电场作用下根据分子量大小和带电荷量进行迁移和分离。该技术操作简便,是分子克隆、PCR等实验的验证手段。
分子克隆:基因获取
本protocol介绍了通过分子克隆技术获取目标基因的通用流程,包括从NCBI获取序列、设计引物、使用SnapGene优化引物、PCR扩增等关键步骤。
荧光定量PCR (mRNA)
本文描述了使用荧光定量PCR技术对样本中特定mRNA的表达水平进行相对或绝对定量的标准流程。主要包括RNA提取、反转录合成cDNA、qPCR反应体系配制与程序运行,以及后续的数据分析步骤。
RNA琼脂糖凝胶电泳
本方案描述了如何选择变性或非变性的RNA琼脂糖凝胶电泳,以及详细步骤,包括RNA样品的处理、上样缓冲液的添加以及上样前的准备。
分子克隆:DNA提取及电泳鉴定
本protocol介绍了从细菌培养物中提取质粒DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳对提取的DNA进行鉴定分析的标准操作流程。该流程是分子克隆中的基础步骤,用于获取和验证重组DNA。
SnapGene分子克隆操作指南
本指南详细介绍了使用SnapGene软件进行分子克隆实验的完整流程,包括载体构建、序列分析、酶切位点选择和虚拟克隆等关键步骤,旨在帮助研究人员高效、准确地设计和模拟分子克隆实验。
基因沉默
本protocol介绍了通过RNA干扰或CRISPR干扰等技术,在细胞或生物体水平上特异性降低或抑制目标基因的表达,以研究该基因在转录调控网络中的功能、对表型的影响以及与其他基因的相互作用的方法。
基因敲低
本protocol描述了通过RNA干扰技术进行基因敲低,以研究特定基因在转录调控中功能的方法。通常包括设计合成siRNA、转染细胞、以及后续验证敲低效率和表型分析等关键步骤。
荧光定量PCR检测miRNA表达
本protocol描述了使用荧光定量PCR(qPCR)技术检测微小RNA(miRNA)表达水平的实验方法。该方法通过特异性逆转录引物将miRNA反转录为cDNA,再利用TaqMan探针或SYBR Green染料进行定量PCR扩增,用于研究基因转录后调控机制。
蛋白-DNA互作研究工具浅析:Cut&Tag 和 Cut&RUN
本文介绍了两种用于研究蛋白质与DNA相互作用的表观遗传学技术——Cut&Tag和Cut&RUN。简介了二者的基本原理、实验流程、优缺点对比以及应用场景,旨在帮助研究人员根据实验需求选择合适的方法。
电泳DNA Marker选择指南
本指南旨在帮助研究人员根据不同的琼脂糖凝胶电泳实验需求,选择合适的DNA分子量标准品(DNA Marker)。内容涵盖不同类型Marker的特性、适用范围、上样量建议以及结果解读要点,以优化DNA片段大小分析的准确性和效率。
构建重组载体
本protocol介绍了通过分子克隆技术构建重组载体的标准流程,包括目的基因的获取、载体与插入片段的制备、连接反应以及转化等关键步骤,是基因工程和功能研究的基础实验。
DNA片段切胶回收
本protocol介绍了从琼脂糖凝胶中回收特定DNA片段的标准化操作流程,包括凝胶电泳分离、目标条带切割、DNA片段纯化与洗脱等步骤。
提高感受态细胞转化效率的几点经验
本文总结了在分子克隆实验中,通过优化感受态细胞制备、质粒处理、热激及复苏等关键步骤,以提高外源DNA转化效率的实用经验和技巧。
优化T4 DNA连接酶连接效率的方法
本protocol旨在通过优化反应条件来提高T4 DNA连接酶在分子克隆实验中的连接效率。通过对关键参数的调整,如DNA浓度、酶量、缓冲液成分和孵育条件,以确保DNA片段的高效、准确连接,适用于构建重组质粒等下游应用。
琼脂糖凝胶电泳实验结果分析
本文介绍了如何分析琼脂糖凝胶电泳的结果,包括DNA条带的识别、大小判断、浓度估算以及结果记录与解读。
质粒鉴定
本文介绍了通过限制性内切酶酶切、琼脂糖凝胶电泳及测序等方法,对构建成功的重组质粒进行验证和鉴定的标准流程。该流程是分子克隆中确认质粒构建是否正确的重要方法。
分子克隆:转化感受态细胞
本文介绍了转化感受态细胞的多种方法。这是将重组质粒DNA导入感受态细菌细胞(如大肠杆菌)的过程,这是分子克隆中的关键步骤,用于扩增质粒或进行后续筛选与表达。
用于RNA提取的缓冲液与各类试剂配制方法
本protocol详细描述了用于RNA提取实验所需的各种缓冲液的配制方法,包括各种缓冲液、无RNase水、琼脂糖凝胶等关键试剂的配方、配制步骤及注意事项,确保RNA提取的质量和纯度。
基因表达分析原位杂交实验
本protocol描述了使用原位杂交技术检测组织或细胞中特定基因mRNA表达的方法。通过设计与目标基因互补的标记探针,与样本中的mRNA进行杂交,并通过显色或荧光信号进行定位和可视化,从而在形态学背景下分析基因的表达模式。
CRISPR/Cas9基因编辑与稳转细胞系构建
本文描述了利用CRISPR/Cas9系统进行基因编辑,并通过抗生素筛选和单克隆化流程构建稳定转染细胞系的方法,用于后续的基因功能与转录调控研究。
CRISPR/Cas9基因编辑用于基因转录调控研究
本protocol介绍了利用CRISPR/Cas9系统进行基因编辑,以研究特定基因的转录调控机制的实验流程。通过设计sgRNA靶向目标基因的调控区域,利用Cas9核酸酶引入双链断裂,通过细胞自身的修复机制实现基因敲除或修饰,进而分析其对转录活性的影响。
miRNA靶基因预测和验证
本protocol旨在通过生物信息学工具预测能与目的基因相互作用的miRNA及结合位点,并利用双荧光素酶报告基因实验等分子生物学方法对预测结果进行实验验证,以研究miRNA在基因转录调控中的作用。
基因过表达
本protocol描述了通过构建过表达载体并转染至目标细胞,以实现特定基因的过表达,进而研究该基因在转录调控中功能的标准实验流程。适用于研究基因功能、信号通路及表型分析。
体外转染
本protocol描述了使用体外转染技术研究基因转录调控的实验方法。通过将外源DNA或RNA导入培养的细胞中,分析其对目标基因表达的影响,常用于启动子活性分析、转录因子功能验证等研究。