蛋白质分析
三种紫外吸收法测蛋白含量方法的对比分析
本文对比了三种基于紫外吸收原理的蛋白质定量方法：280nm直接测定法、280nm和260nm吸收差法和215nm与225nm吸收差法。详细阐述了各方法的原理、操作步骤、优缺点及适用范围，旨在帮助实验者根据样本特性和实验需求选择最合适的方法，以获得准确可靠的蛋白质浓度数据。
Western Blot 实验操作指南
本指南描述了Western Blot实验的标准操作流程，用于检测特定蛋白质在复杂样品中的表达情况。该技术涉及蛋白质电泳分离、转膜、抗体孵育及化学发光检测等关键步骤，是生命科学研究中常用的蛋白质分析方法。
IP免疫沉淀成功指南
本指南提供了进行免疫沉淀（IP）实验的详细步骤与关键注意事项，旨在帮助研究人员从细胞或组织裂解物中高效、特异地富集目标蛋白，以用于后续的蛋白质相互作用研究、翻译后修饰分析或蛋白质功能验证。
免疫共沉淀（CO-IP）
本protocol介绍了使用免疫共沉淀技术研究蛋白质相互作用的实验流程。通过特异性抗体捕获靶蛋白及其相互作用蛋白，随后通过洗脱获取蛋白复合物进行Western Blot分析，验证蛋白间的直接或间接结合。该方法是研究蛋白复合物和信号通路的常用手段。
免疫荧光（IF）
本protocol描述了使用免疫荧光技术对细胞或组织样本中特定蛋白质的表达进行定位和半定量分析的实验流程。该方法通过荧光标记的特异性抗体与目标蛋白结合实现可视化，可在荧光显微镜下观察蛋白的亚细胞定位及表达水平。
Western Blot 常规全流程
本protocol描述了通过Western Blot技术检测特定蛋白质表达水平的标准流程。主要包括蛋白质样品制备、SDS-PAGE凝胶电泳分离、转膜、特异性一抗和二抗孵育，最后通过化学发光成像进行分析。
实验后蛋白相互作用分析
本文描述了在完成相关实验（如免疫共沉淀、酵母双杂交、Pull-down等）后，对获得的蛋白质样品进行相互作用验证和分析的流程。通常包括样品处理、电泳分离、免疫印迹检测及数据分析等步骤，旨在确认蛋白质间的直接或间接结合关系。
免疫组化（IHC）
本protocol描述了使用免疫组化技术对组织切片中的特定蛋白进行定位和半定量分析的标准流程。该方法通过抗原-抗体特异性反应与化学显色，在显微镜下可视化目标蛋白在组织中的分布与表达水平。
小鼠皮肤组织蛋白提取
本协议描述了从小鼠皮肤组织中提取总蛋白的实验方法，适用于后续的蛋白质印迹、ELISA等蛋白质分析。流程包括组织样本的获取、清洗、匀浆裂解、离心及蛋白浓度测定等关键步骤。
Western Blot常见问题分析与解决
本文针对Western Blot实验中可能遇到的常见问题，如无信号、高背景、非特异性条带等，以及如何选择内参、特定蛋白的处理方法等，提供系统的故障排查思路与解决方案，旨在帮助实验者优化实验条件，获得清晰可靠的结果。
Co-IP 实验零基础教学
本protocol是面向零基础研究人员的免疫共沉淀（Co-IP）实验指南，可在非变性条件下捕获并验证生理状态下蛋白质之间的相互作用。通过使用特异性抗体沉淀目标蛋白及其结合蛋白，随后进行免疫印迹分析，从而证实蛋白间的直接或间接结合。
磷酸化蛋白的Western Blot经验总结
本文总结了使用Western Blot技术检测和分析磷酸化蛋白表达水平的实验经验，介绍了诸多难点要点，如如何有效保持蛋白质磷酸化状态、优化实验条件以及提高检测特异性。
镍柱纯化标签蛋白
本protocol描述了一种镍柱纯化方法，也就是亲和层析（IMAC）。该方法利用组氨酸标签与镍离子的特异性结合，通过改变洗脱条件（咪唑浓度）将带有组氨酸标签（His-tag）的重组蛋白从杂蛋白中分离出来，是重组蛋白纯化的常用技术。
Pull-down 实验
本protocol描述了一种主流蛋白质相互作用的研究方法。将目的蛋白结合特定标签如GST或His等，与感兴趣的蛋白相互作用形成复合物，最后通过亲和层析等方法从细胞裂解液中捕获并验证与其相互作用的靶蛋白的实验流程。这是一种体外验证或发现蛋白质间直接相互作用的重要技术。
Bradford法测定蛋白质含量
本protocol描述了使用Bradford法测定溶液中蛋白质含量的标准流程。该方法的原理是考马斯亮蓝G-250染料与蛋白质结合后产生蓝色复合物引起吸光度变化，通过在595 nm波长下进行比色分析来测定未知样品的蛋白质浓度。该法快速、灵敏且操作简便，适用于多种生物样品的蛋白质定量分析。
Dot Blot 实验
本protocol描述的是Dot Blot技术，此法用于快速、半定量检测蛋白质与核酸水平。该技术将蛋白质样品直接点样于固相载体上，通过特异性抗体或探针与待测物进行杂交显色，得知目标分子是否存在
SDS-PAGE 和 PAGE 蛋白质电泳
本文介绍了SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）和PAGE（非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳）两种电泳技术，二者的关键差别在于SDS-PAGE中加入了使蛋白质变性的SDS。SDS-PAGE仅根据分子量大小分离蛋白质，而PAGE则是在非变性条件下根据蛋白质的电荷、大小和形状等进行分离。
蛋白翻译后修饰对Western Blot实验结果的影响
本文介绍了一种在WB实验中常被忽略的影响因素：蛋白质翻译后修饰（如磷酸化、糖基化）对Western Blot实验结果的多种影响。
考马斯亮蓝染色
本protocol介绍的是使用考马斯亮蓝染色法对蛋白质进行定性和半定量分析的方法。考马斯亮蓝染料与蛋白质的碱性氨基酸结合产生蓝色复合物，对凝胶或膜上的蛋白质条带进行染色，可以检测蛋白质表达水平、纯化效果或电泳分离结果。
三种紫外吸收法测蛋白含量方法的对比分析
本文对比分析了三种基于紫外吸收原理的蛋白质定量方法：280nm直接测定法、280nm与260nm吸收差法和215nm与225nm吸收差法。与bradford等基于染色的方法不同，这三种方法仅使用分光光度计进行测定。老司机的计算器中有第二种方法的预设。
跨膜蛋白样本制备前处理注意事项
本方案概述了针对跨膜蛋白进行样本制备（如前处理）时的关键注意事项与操作要点。跨膜蛋白疏水性强、结构复杂，易聚集或失活，方案旨在通过优化裂解、增溶、稳定化等步骤，为后续的Western Blot、质谱分析等下游应用获取高质量蛋白样本。
细胞热位移实验方案
本protocol描述了细胞热位移实验（Cellular Thermal Shift Assay, CETSA）的流程，通过蛋白质对热稳定性的不同相应，可在细胞裂解物或完整细胞中分析目标蛋白的完整性与溶解性，从而间接评估小分子化合物与靶蛋白的结合情况。
蛋白相互作用实验技术：IP、Co-IP、ChIP、RIP原理与应用
本文概述了四种研究蛋白质相互作用的经典免疫沉淀技术：免疫沉淀（IP）、免疫共沉淀（Co-IP）、染色质免疫沉淀（ChIP）和RNA免疫沉淀（RIP）。这些方法分别用于分离特定蛋白质、验证蛋白质-蛋白质相互作用、研究蛋白质与DNA的结合以及分析蛋白质与RNA的相互作用，是分子生物学和细胞生物学研究中的重要工具。
酵母双杂交（Y2H）实验
酵母双杂交是一种在酵母细胞内检测蛋白质相互作用的经典分子生物学技术：通过两种目标蛋白分别克隆到转录因子的DNA结合结构域和转录激活域上，构建融合表达载体，利用报告基因的激活与否来间接验证蛋白间的相互作用。本protocol介绍的是标准流程。
间接竞争ELISA
本文描述了间接竞争ELISA的实验流程，用于检测样品中特定抗原或半抗原的浓度。该方法基于样品中的游离抗原与包被抗原竞争结合有限量的特异性一抗，再通过酶标二抗和底物显色进行定量分析，信号强度与样品中抗原浓度成反比。
抗体效价测定
本文描述了通过酶联免疫吸附测定（ELISA）等方法，测定血清或其他样品中特异性抗体相对浓度（效价）的标准流程。通常用于评估疫苗接种效果、疾病诊断或免疫应答研究。
从不同类型样本中分离膜蛋白的方法
本方案详细介绍了从细胞、组织等不同类型生物样本中分离和富集膜蛋白的实验流程。通过匀浆、差速离心、密度梯度离心等关键步骤，旨在获得高纯度、高完整性的膜蛋白，为后续的蛋白质组学、功能与相互作用研究提供高质量的样品基础。