细胞实验
CCK-8法测细胞增殖/毒性
本实验方案详细介绍了使用CCK-8试剂盒进行细胞增殖和毒性检测的方法。通过WST-8在活细胞线粒体脱氢酶作用下还原为呈现黄色的甲臜的原理,利用酶标仪测定450 nm吸光度,间接反映活细胞数量,用于评估药物作用效果、计算IC50及绘制生长曲线。方案包含贴壁与悬浮细胞两种操作流程及关键注意事项。
DiD标记外泌体细胞摄取实验
本实验方案介绍了一种通过使用亲脂性荧光染料DiD标记外泌体,并与靶细胞共孵育,以检测和分析细胞对外泌体的摄取情况的方法。这是一种常用的细胞表型分析技术,用于研究细胞间通讯和物质转运。
Transwell迁移实验(6孔板)
本方案使用6孔板Transwell小室进行细胞迁移能力分析,是一种常用的体外细胞表型研究方法。通过将细胞接种于上室,利用下室中的趋化因子诱导细胞迁移穿过聚碳酸酯膜,从而评估细胞的迁移潜能。
细胞表型分析:鬼笔环肽细胞骨架染色
本方案描述了使用荧光标记的鬼笔环肽对培养细胞中的肌动蛋白细胞骨架进行染色,以观察和分析细胞形态、铺展、粘附及骨架结构等表型特征。这是一种常用的细胞生物学成像技术。
划痕实验
划痕实验(伤口愈合实验)是一种用于评估细胞迁移能力的体外实验方法。通过在融合的单层细胞上人为制造划痕,模拟伤口愈合过程,定期观察并测量划痕宽度的变化,从而分析药物、基因等因素对细胞迁移的影响。
细胞共培养实验方案
本方案详细介绍了使用Transwell系统进行细胞共培养的实验方法。通过将肿瘤细胞与成纤维细胞(NIH 3T3)分别接种于Transwell小室的上层和下层,在共享环境(培养基)但不直接接触的条件下共培养,以模拟体内微环境并研究细胞间相互作用。方案涵盖了细胞接种、共培养及后续分析的关键步骤。
显微镜观察细胞共培养的表型分析
本方案总结了利用显微镜观察两种不同类型细胞在共培养条件下的形态、生长及相互作用等表型特征的经验。通过共培养体系,可以研究细胞间的通讯、竞争或支持等生物学行为,是细胞功能研究的重要手段。
细胞原代分离和培养
本方案详细介绍了从动物或临床组织样本中进行原代细胞分离和培养的完整流程。内容包括组织获取、分离、解离(机械法与酶消化法)以及接种培养的关键步骤与注意事项,旨在获得高存活率的原代细胞用于后续研究。
小鼠脾脏Naive CD4+ T细胞的分离和原代培养
本protocol详细描述了从小鼠脾脏中分离和纯化Naive CD4+ T细胞,并进行原代培养的实验流程。该方法基于磁珠分选技术,旨在获得高纯度的目标细胞,用于后续的免疫学功能研究。
如何合理设计细胞实验的加药浓度
本文旨在为生命科学研究人员提供一套系统的方法,用于设计和优化细胞实验中的药物处理浓度。内容涵盖从预实验浓度范围探索到正式实验浓度梯度设置的全流程,包括基于IC50/EC50、临床数据及文献参考的多种策略,以确保实验结果的可靠性和生物学意义。
EdU 染色测细胞增殖
本实验方案详细介绍了使用EdU(5-Ethynyl-2'-deoxyuridine)染色法检测细胞增殖的完整流程。该方法基于EdU在细胞DNA合成期(S期)的掺入,并通过点击化学与荧光标记物结合,利用荧光显微镜或流式细胞仪进行检测和定量分析,以评估细胞的增殖活性。方案涵盖了从细胞接种、药物处理、EdU掺入、固定通透、染色到图像采集与数据分析的具体步骤。
MTT法测细胞增殖/毒性
本实验方案详细介绍了使用MTT法进行细胞表型分析,以评估细胞活性、增殖能力以及药物毒性的流程。该方法基于活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能将MTT还原为水不溶性的蓝紫色甲瓒结晶,通过酶标仪测定溶解后的吸光度值来间接反映活细胞数量。方案涵盖了贴壁细胞和悬浮细胞两种操作流程,并提供了详细的结果计算方法和注意事项。
Transwell迁移实验
本实验方案描述了使用Transwell装置评估细胞迁移能力的标准流程。通过物理隔离上下室,模拟体内环境,利用化学诱导剂吸引细胞穿过微孔膜,随后对迁移至下室的细胞进行固定、染色和计数,以量化细胞的迁移能力。
Transwell细胞侵袭实验
本实验方案详细介绍了利用Transwell小室进行细胞侵袭实验的方法。通过在多孔膜上涂覆基质胶模拟细胞外基质,将细胞接种于上室,并在下室添加化学引诱剂,孵育后对迁移至下室的细胞进行固定、染色和计数,以定量评估细胞的侵袭和迁移能力。该方法是研究癌细胞侵袭性等细胞表型的重要工具。
克隆形成实验
克隆形成实验是研究细胞存活率并探讨单个细胞增殖潜能的有效方法。通过在体外培养环境下,使单个细胞经过连续分裂繁殖至少6代,形成含有50个以上细胞的克隆(集落),从而评估细胞的增殖能力、群体依赖性,并可用于药物或治疗方案的筛选。
细胞免疫荧光检测NF-κB移位入核
本方案通过免疫荧光染色技术,检测细胞在特定刺激下,转录因子NF-κB从细胞质移位至细胞核的过程,以评估细胞激活状态或信号通路响应。
类囊体提取方案
本方案描述了从植物幼苗样本中提取类囊体的标准流程。通过使用冰冷的分离缓冲液、快速均质化、过滤和梯度离心,旨在获得尽可能纯净的类囊体,用于后续如磷酸化蛋白等研究。整个过程需在低温、避光条件下进行,并使用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的缓冲液以保持蛋白完整性。
BMDC细胞的制备与培养
本方案详细描述了从小鼠骨髓中分离、诱导和培养树突状细胞(BMDC)的具体操作流程,包括骨髓单核细胞的获取、GM-CSF诱导分化、细胞换液与扩增、以及收获前的表型鉴定准备。方案涵盖了关键的材料准备、无菌操作要点和细胞状态评估标准。