实验方案库
细胞表型分析:鬼笔环肽细胞骨架染色
本方案描述了使用荧光标记的鬼笔环肽对培养细胞中的肌动蛋白细胞骨架进行染色,以观察和分析细胞形态、铺展、粘附及骨架结构等表型特征。这是一种常用的细胞生物学成像技术。
划痕实验
划痕实验(伤口愈合实验)是一种用于评估细胞迁移能力的体外实验方法。通过在融合的单层细胞上人为制造划痕,模拟伤口愈合过程,定期观察并测量划痕宽度的变化,从而分析药物、基因等因素对细胞迁移的影响。
细胞共培养实验方案
本方案详细介绍了使用Transwell系统进行细胞共培养的实验方法。通过将肿瘤细胞与成纤维细胞(NIH 3T3)分别接种于Transwell小室的上层和下层,在共享环境(培养基)但不直接接触的条件下共培养,以模拟体内微环境并研究细胞间相互作用。方案涵盖了细胞接种、共培养及后续分析的关键步骤。
显微镜观察细胞共培养的表型分析
本方案总结了利用显微镜观察两种不同类型细胞在共培养条件下的形态、生长及相互作用等表型特征的经验。通过共培养体系,可以研究细胞间的通讯、竞争或支持等生物学行为,是细胞功能研究的重要手段。
细胞原代分离和培养
本方案详细介绍了从动物或临床组织样本中进行原代细胞分离和培养的完整流程。内容包括组织获取、分离、解离(机械法与酶消化法)以及接种培养的关键步骤与注意事项,旨在获得高存活率的原代细胞用于后续研究。
冰冻切片及组织HE染色样本制备
本方案描述了如何对组织样本进行冰冻切片,并进行常规的苏木精-伊红(HE)染色,以用于组织形态学的观察和分析。该流程是组织病理学的基础技术之一。
跨膜蛋白样本制备前处理注意事项
本方案概述了针对跨膜蛋白进行样本制备(如前处理)时的关键注意事项与操作要点。跨膜蛋白疏水性强、结构复杂,易聚集或失活,方案旨在通过优化裂解、增溶、稳定化等步骤,为后续的Western Blot、质谱分析等下游应用获取高质量蛋白样本。
细胞热位移实验方案
本protocol描述了细胞热位移实验(Cellular Thermal Shift Assay, CETSA)的流程,通过蛋白质对热稳定性的不同相应,可在细胞裂解物或完整细胞中分析目标蛋白的完整性与溶解性,从而间接评估小分子化合物与靶蛋白的结合情况。
蛋白相互作用实验技术:IP、Co-IP、ChIP、RIP原理与应用
本文概述了四种研究蛋白质相互作用的经典免疫沉淀技术:免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(Co-IP)、染色质免疫沉淀(ChIP)和RNA免疫沉淀(RIP)。这些方法分别用于分离特定蛋白质、验证蛋白质-蛋白质相互作用、研究蛋白质与DNA的结合以及分析蛋白质与RNA的相互作用,是分子生物学和细胞生物学研究中的重要工具。
酵母双杂交(Y2H)实验
酵母双杂交是一种在酵母细胞内检测蛋白质相互作用的经典分子生物学技术:通过两种目标蛋白分别克隆到转录因子的DNA结合结构域和转录激活域上,构建融合表达载体,利用报告基因的激活与否来间接验证蛋白间的相互作用。本protocol介绍的是标准流程。
蛋白-DNA互作研究工具浅析:Cut&Tag 和 Cut&RUN
本文介绍了两种用于研究蛋白质与DNA相互作用的表观遗传学技术——Cut&Tag和Cut&RUN。简介了二者的基本原理、实验流程、优缺点对比以及应用场景,旨在帮助研究人员根据实验需求选择合适的方法。
大鼠急性与慢性肩袖损伤模型构建
本protocol介绍了通过手术方法建立大鼠肩袖急性撕裂与慢性退变性损伤模型的详细步骤,用于模拟人类肩袖疾病的病理过程,可以作为研究肩袖损伤修复机制与治疗策略的关键临床前实验模型。
动物实验方案设计思路
本文概述了动物实验方案设计的基本框架与核心思路,包括实验目的、动物选择、分组设计、伦理考量、观察指标及数据分析方法等关键环节,旨在为开展规范的动物实验提供指导。
动物实验基础操作
本文介绍了动物实验所需的基础操作流程,包括实验动物的准备、基本操作技术(如抓取、固定、标记、给药、采样等)以及实验后的处理。适用于需要使用实验动物进行初步研究的科研人员。
动物实验给药操作
本文介绍了在动物实验中进行安全、准确给药的标准化操作流程,包括常见的给药途径(如灌胃、腹腔注射、皮下注射等)的准备、操作步骤与术后观察要点,旨在确保动物福利与实验数据的可靠性。
急性、亚急性、亚慢性和慢性毒性实验
本protocol介绍了在啮齿类动物(如大鼠或小鼠)中进行不同持续时间的全身毒性测试的标准程序,旨在评估受试物在单次给药(急性)、重复给药28天(亚急性)、90天(亚慢性)或更长时间(慢性)后对生物体的毒性效应,包括临床观察、体重监测、血液学、临床生理解剖病理学检查等。
小鼠骨髓细胞染色体标本制作
本protocol介绍了从小鼠骨髓细胞中制备染色体标本的详细步骤,包括秋水仙素处理、低渗处理、固定、滴片和染色等关键环节,用于后续的染色体核型分析或畸变观察。
小鼠结肠标本留取与瑞士卷制片操作
本protocol详细描述了从小鼠解剖获取结肠组织标本,到通过瑞士卷技术将长条状结肠组织卷曲成卷,并进行固定、包埋、切片和染色的完整组织病理学制片流程。该技术旨在最大化地在一张切片上展示结肠的全长结构,便于观察和分析如炎症、病变等病理变化。
小鼠脑立体定位注射
本protocol介绍了使用立体定位仪对小鼠特定脑区进行精确定位并注射病毒、药物或示踪剂等物质的标准化操作流程。该技术是神经科学研究中操控或标记特定神经元群体的重要方法。
小鼠脾脏Naive CD4+ T细胞的分离和原代培养
本protocol详细描述了从小鼠脾脏中分离和纯化Naive CD4+ T细胞,并进行原代培养的实验流程。该方法基于磁珠分选技术,旨在获得高纯度的目标细胞,用于后续的免疫学功能研究。
小鼠心脏灌流实验
该实验是通过对小鼠进行心脏灌流,以清除循环系统中的血液,并灌注固定液,从而为后续的组织学分析(如免疫组化、原位杂交等)或特定器官(如脑、心脏等)的离体研究获取高质量、无血细胞干扰的组织样本。这是神经科学、心血管研究等领域常用的关键技术。
电泳DNA Marker选择指南
本指南旨在帮助研究人员根据不同的琼脂糖凝胶电泳实验需求,选择合适的DNA分子量标准品(DNA Marker)。内容涵盖不同类型Marker的特性、适用范围、上样量建议以及结果解读要点,以优化DNA片段大小分析的准确性和效率。
构建重组载体
本protocol介绍了通过分子克隆技术构建重组载体的标准流程,包括目的基因的获取、载体与插入片段的制备、连接反应以及转化等关键步骤,是基因工程和功能研究的基础实验。
DNA片段切胶回收
本protocol介绍了从琼脂糖凝胶中回收特定DNA片段的标准化操作流程,包括凝胶电泳分离、目标条带切割、DNA片段纯化与洗脱等步骤。
提高感受态细胞转化效率的几点经验
本文总结了在分子克隆实验中,通过优化感受态细胞制备、质粒处理、热激及复苏等关键步骤,以提高外源DNA转化效率的实用经验和技巧。
优化T4 DNA连接酶连接效率的方法
本protocol旨在通过优化反应条件来提高T4 DNA连接酶在分子克隆实验中的连接效率。通过对关键参数的调整,如DNA浓度、酶量、缓冲液成分和孵育条件,以确保DNA片段的高效、准确连接,适用于构建重组质粒等下游应用。
琼脂糖凝胶电泳实验结果分析
本文介绍了如何分析琼脂糖凝胶电泳的结果,包括DNA条带的识别、大小判断、浓度估算以及结果记录与解读。
质粒鉴定
本文介绍了通过限制性内切酶酶切、琼脂糖凝胶电泳及测序等方法,对构建成功的重组质粒进行验证和鉴定的标准流程。该流程是分子克隆中确认质粒构建是否正确的重要方法。
分子克隆:转化感受态细胞
本文介绍了转化感受态细胞的多种方法。这是将重组质粒DNA导入感受态细菌细胞(如大肠杆菌)的过程,这是分子克隆中的关键步骤,用于扩增质粒或进行后续筛选与表达。
用于RNA提取的缓冲液与各类试剂配制方法
本protocol详细描述了用于RNA提取实验所需的各种缓冲液的配制方法,包括各种缓冲液、无RNase水、琼脂糖凝胶等关键试剂的配方、配制步骤及注意事项,确保RNA提取的质量和纯度。